Имуноанализ за кръвен тест в паразитология

2023 Автор: Riley Dean | [email protected]. Последно модифициран: 2023-08-25 08:38

Ензимно свързан имуносорбентен анализ се провежда, когато възникнат трудности с диагнозата, ако пациентът има наследствено предразположение към определени заболявания, за да се оцени ефективността на лечението. ELISA е съвременен лабораторен тест, който помага да се идентифицират специфични антитела в кръвта за определени заболявания. Методът е силно специфичен и чувствителен.

Съдържанието на статията:

1 Имуноанализ
2 Основни понятия и принцип на ензимния имуноанализ
3 различни класове антитела IgG, IgM, IgA
- 3.1 IgM антитела
- 3.2 IgG антитела
- 3.3 IgA антитела
4 Предимства на метода
5 Недостатъци на метода
6 Показания за назначаване и откриваеми заболявания
7 Анализираният биоматериал и особеностите на неговото събиране
8 Условия за готовност на резултатите от ELISA
9 Интерпретация на ензимен имуноанализ
10 Възможни резултати от ELISA
11 В заключение

Свързан имуносорбентен анализ

Анализът разкрива антигени, характерни за определени патогени и антитела към тях. Ензимно свързаният имуносорбентен анализ се основава на реакцията на взаимодействие на антиген със специфично антитяло, в резултат на което се образува комплекс, който съдържа специален етикет, който променя цвета на пробата под действието на реагента.

Интензитетът на оцветяването дава възможност да се прецени наличието на антитела или антигени, характерни за определена инфекция, и вече с помощта на оборудването се определя тяхното количество. Антигените са чужди вещества, които предизвикват реакция на имунна защита в организма - произвеждат се специфични протеини (имуноглобулини).

Всеки патоген има свой набор от антигени, а имунният отговор към тях също е специфичен. Основният материал за анализ е кръв от вена.

Ензимно свързаният имуносорбентен анализ дава възможност да се идентифицира с латентни заболявания с висока точност на ранен етап, информира лекаря за общото състояние на пациента и за рисковете от развитие на патологии, за състоянието на репродуктивното здраве.

Извършва се анализ за диагностициране на вирусни заболявания: херпес, хепатит, цитомегаловирус, вирус на Епщайн-Бар и др., Полово предавани инфекции: гонорея, уреаплазма, хламидоза, микоплазма, трихомонада, сифилис, за определяне на хормоналните нива, диагностициране на рак и имунодефицит, откриване и лечение на алергии. За анализа, в допълнение към кръвта, можете да вземете и цереброспинална течност, околоплодна течност и съдържанието на стъкловидното тяло.

Анализът предполага използването на група ELI тестове:

ELI-B тест, който позволява да се направи заключение за състоянието на имунната система;
ELI-Dia-тест, който определя състоянието на ендокринната система. С негова помощ се диагностицира диабет от първи и втори вид;
ELI-N-Complex-12, който информира за състоянието на периферната и централната нервна система;
ELI-Ankor-test-12, анализ, който оценява състоянието на сърцето и кръвоносните съдове, оценява риска от развитие на инсулт, инфаркт;
ELI-Viscero-16 се прави за оценка на общото състояние на пациента. Този тест осигурява диагностика за 16 показателя: черва, нервна система, миокард, бъбреци, имунна система, черен дроб, стомах и др.;
ELI-P-комплекс-12 е направен за оценка на репродуктивния капацитет на тялото;
ELI-GIT-12 - анализ, който оценява състоянието на стомашно-чревния тракт и дава възможност да се предвиди рискът от развитие на патологии;
Тестът ELI-HCG-APS разкрива нарушения в репродуктивното здраве.

Основни понятия и принцип на ензимния имуноанализ

Ензимно свързаният имуносорбентен анализ (ELISA) е лабораторен диагностичен метод, основан на реакцията "антиген-антитяло", който позволява откриване на протеинови вещества (включително ензими, вируси, бактериални фрагменти и други компоненти на биологични течности). За да разберем как работи ензимният имуноанализ, нека се опитаме да разберем същността на реакцията "антиген-антитяло". Антигенът е молекула, чужда на тялото, обикновено с протеинов произход, която може да навлезе в човешкото тяло заедно с инфекциозен агент.

Частици от чужда кръв (ако тя не съответства на нашата група) също са антигени. В организма антигените са в състояние да предизвикат имунен отговор, насочен към защита на целостта на вътрешната среда от чужди вещества. Следователно тялото ни синтезира специални вещества - антитела (имуноглобулини), способни да се свързват с антигени според принципа „ключ за заключване“, свързвайки ги в имунен комплекс (този процес се нарича реакция „антиген-антитяло“).

Свързан имуносорбентен анализ. Такива имунни комплекси се разпознават по-лесно и се унищожават от имунните клетки. Има няколко вида антитела, всяко от които влиза в действие на определен етап от имунния отговор. По този начин имуноглобулините от клас М (IgM) се синтезират първо в отговор на проникването на антиген в тялото.

Съдържанието на тези антитела е най-високо в първите дни на инфекциозния процес. След тях имунната система освобождава в кръвта имуноглобулини от клас G (IgG), които помагат за унищожаване на антигени, докато инфекцията бъде напълно победена, а също така продължават да циркулират през съдовете в бъдеще, осигурявайки имунитет за повторна инфекция.

Ваксинацията се основава на това явление: благодарение на ваксинациите, съдържащи отслабени антигени на микроби и вируси, в кръвта ни се появява голямо количество IgG, които при контакт с реална заплаха бързо потискат инфекцията - преди това да навреди на здравето. Има и имуноглобулини от клас А (те се намират в големи количества в лигавиците, предпазвайки „подходите“към тялото), Е (борба с паразитни инфекции) и други.

В лабораторната диагностика най-често обектът на интерес са IgM, IgG и IgA: чрез тяхната концентрация е възможно да се прецени на кой етап е инфекциозният процес, а също и да се установи дали човек някога е боледувал от една или друга болест (например рубеола или варицела). Как да разберете кои антигени или антитела присъстват в човешкото тяло? Когато лекарят подозира, че определена инфекция е причината за заболяването или иска да измери концентрацията на определен хормон, той предписва ензимен имуноанализ за пациента.

Реакцията "антиген-антитяло" може да бъде възпроизведена в лабораторни условия: използвайте готови антитела или антигени, за да определите дали съответното съединение присъства в изследваната проба. Първо, трябва да вземете проба от биологична течност - обикновено кръвен серум. Лабораторията използва пластмасови плаки с ямки, които вече съдържат пречистени антигени на предполагаемия патоген (или антитела, ако задачата е да се търси антиген).

Пробите се поставят в кладенци, където се образуват - или не - имунни комплекси. Ако "срещата" се е състояла, определено багрило влиза в ензимна реакция с комбинираната молекула, което позволява да се направи заключение за резултатите от анализа с помощта на инструментална оценка на оптичната плътност.

ELISA е качествен и количествен. В първия случай се подразбира недвусмислен отговор: желаното вещество се намира или не се намира в пробата.

В случай на количествен анализ, по-сложна верига от реакции дава възможност да се оцени концентрацията на антитела в кръвта на човека, което в сравнение с резултатите от предишни тестове ще отговори на въпроса как се развива инфекциозният процес. Интересното е, че предшественикът на ензимния имуноанализ е радиоимуноанализ, който използва белязани антитела и антигени, за да идентифицира успешна реакция. Тъй като извършването на такава диагностика представляваше потенциална заплаха за здравето на лабораторните служители, учените започнаха да търсят безопасна алтернатива за „оцветяване” на пробите. Така през 1971 г. е изобретен IFA.

Различни класове антитела IgG, IgM, IgA

Ензимно свързаният имуносорбентен анализ открива антитела на инфекции, принадлежащи към различни класове на Ig (G, A, M). Антителата към вируса при наличие на инфекция се определят на много ранен етап, което осигурява ефективна диагностика и контрол на хода на заболяванията. Най-честите методи за диагностициране на инфекции са тестове за IgM антитела (остра фаза на инфекция) и IgG антитела (резистентни към инфекция). Тези антитела са определени за повечето инфекции.

Въпреки това, един от най-често срещаните тестове - болничен скрининг (тестове за ХИВ, сифилис и хепатит В и С) не диференцира типа антитела, тъй като наличието на антитела към вирусите на тези инфекции автоматично подсказва за хроничен ход на заболяването и е противопоказание, например за сериозни хирургични интервенции. Ето защо е важно да опровергаете или потвърдите диагнозата.

Свързан имуносорбентен анализ. Подробна диагноза за вида и количеството на антителата при диагностицирано заболяване може да се направи, като се направи анализ за всяка конкретна инфекция и вид антитела. Първичната инфекция се открива, когато се установи диагностично значимо ниво на IgM антитела в кръвна проба или значително увеличение на броя на IgA или IgG антитела в сдвоени серуми, взети с интервал от 1-4 седмици.

Реинфекцията или повторната инфекция се открива чрез бързо повишаване на нивата на IgA или IgG антитела. IgA антителата са по-високи при възрастни пациенти и по-точно диагностицират настоящата инфекция при възрастни.

Миналата инфекция в кръвта се определя като повишени IgG антитела без повишаване на концентрацията им в сдвоени проби, взети с интервал от 2 седмици. В същото време няма антитела от класове IgM и A.

IgM антитела

Концентрацията им се повишава скоро след заболяването. IgM антителата се откриват още 5 дни след началото му и достигат пик в интервала от една до четири седмици, след което намаляват до диагностично незначителни нива в рамките на няколко месеца дори без лечение. За пълна диагноза обаче не е достатъчно да се определят само антитела от клас М: отсъствието на този клас антитела не означава отсъствие на болестта. Няма остра форма на заболяването, но може да бъде хронична.

IgM антителата са от голямо значение за диагностицирането на хепатит А и детски инфекции (рубеола, магарешка кашлица, варицела), лесно предавани чрез въздушни капчици, тъй като е важно болестта да се идентифицира възможно най-рано и да се изолира болния човек.

IgG антитела

Основната роля на IgG антителата е дългосрочната защита на организма срещу повечето бактерии и вируси - въпреки че производството им протича по-бавно, отговорът на антигенен стимул остава по-стабилен от този на антитела от клас IgM.

Свързан имуносорбентен анализ. Нивата на IgG антитела се повишават по-бавно (15-20 дни след началото на заболяването), отколкото IgM, но остават повишени за по-дълго време и следователно могат да покажат дългогодишна инфекция при липса на IgM антитела. Нивата на IgG могат да бъдат ниски в продължение на много години, но при многократно излагане на същия антиген, нивата на IgG антитела се повишават бързо.

За пълна диагностична картина е необходимо едновременно да се определят IgA и IgG антитела. Ако резултатът от IgA е неясен, потвърждение чрез определяне на IgM. В случай на положителен резултат и за точна диагноза, втори тест, направен 8-14 дни след първия, трябва да се проверява паралелно, за да се определи повишаването на концентрацията на IgG. Резултатите от анализа трябва да се тълкуват заедно с информацията, получена при други диагностични процедури.

По-специално, IgG антителата се използват за диагностициране на Helicobacter pylori, една от причините за язви и гастрити.

IgA антитела

Те се появяват в серума 10-14 дни след началото на заболяването, а в началото дори могат да бъдат открити в семенни и вагинални течности. Нивата на IgA антитела обикновено намаляват с 2-4 месеца след инфекцията, ако лечението е успешно. При повторна инфекция нивото на IgA антитела отново се повишава. Ако нивото на IgA не спадне след лечението, тогава това е признак на хронична форма на инфекция.

Предимства на метода

Безспорните предимства на ELISA са високата чувствителност и специфичност на метода. Чувствителността е способността за разпознаване на целевото вещество, дори ако концентрацията му в пробата е ниска. Спецификата, от друга страна, предполага диагноза без грешки: ако резултатът е положителен, това означава, че точно антитялото или антигенът, за които се предполага, че са намерени, а не някои други.

Имуносорбентният анализ, свързан с ензима, до голяма степен замести "златния стандарт" на микробиологията - бактериологичен метод за диагностика, по време на който, за да се идентифицира патоген, беше необходимо неговото изолиране от тялото и след това да отглежда културата върху хранителна среда в епруветка в продължение на няколко дни. През цялото време, докато се правеше анализът, лекарите бяха принудени да лекуват пациента „сляпо“, гадаейки за произхода на микроорганизма по симптомите на заболяването.

Определянето на IgM с помощта на ELISA ви позволява да поставите точна диагноза в първите дни на заболяването. Високата степен на обработваемост на ензимния имуноанализ намалява до минимум влиянието на човешкия фактор, което намалява вероятността от грешка. Повечето от тестовите комплекти и реагенти ELISA, използвани в съвременните лаборатории, са произведени в индустриална среда, което гарантира точен резултат.

Недостатъци на метода

За съжаление, за да извършите ELISA, трябва да знаете какво точно да търсите: техниката на анализ предполага, че лекарят има предположение предварително за естеството на заболяването. Затова няма смисъл да се предписва такъв тест с надеждата случайно да "отгатне" диагнозата. В случай на диагнозата на инфекциозни заболявания, ензимният имуноанализ не може да намери патогена и да определи неговите специфични свойства: той само показва наличието на антитела в кръвта на пациента, индиректно показва наличието на чужд микроорганизъм в човешкото тяло.

ELISA е изключително точен, но не евтин метод, така че трябва да го използвате разумно, а квалифициран лекар трябва да интерпретира резултатите.

Показания за назначаване и открити заболявания

Невъзможно е да се покрие пълният списък с показания за ELISA. Най-честите цели на анализа са: Диагностика на остри и хронични инфекциозни заболявания:

IgM и IgG до вирусен хепатит А, В, С, Е, както и антигени срещу хепатит В и С;
IgG към HIV; Ig M и IgG до цитомегаловирусна инфекция;
Ig M и IgG до вирус Epstein-Barr; Ig M и IgG до херпесни инфекции;
Ig M и IgG до токсоплазмоза;
Ig M и IgG за морбили, рубеола, салмонелоза, дизентерия, енцефалит, пренасян от кърлежи и други заболявания;
IgG до паразитни заболявания;
Ig M и IgG до полово предавани инфекции;
IgG до Helicobacter pylori инфекция.

Обща оценка на показателите за човешкия имунитет и маркери на някои автоимунни заболявания. Идентифициране на онкологични маркери (тумор некрозен фактор, простатен-специфичен антиген, раково-ембрионален антиген и други). Определяне съдържанието на хормони в кръвния серум (прогестерон, пролактин, тестостерон, тиреостимулиращ хормон и други).

Анализираният биоматериал и особеностите на неговото събиране

Основният биоматериал за ELISA е кръвен серум: в лабораторията се взема кръвна проба от пациента от вена, от която допълнително се отстраняват оформените елементи, които усложняват анализа. В някои други случаи за анализ се използват цереброспинална течност, околоплодна течност, намазки на лигавиците и др.

За да се избегнат изкривявания в резултатите, се препоръчва да се дарява кръв на празен стомах, а две седмици преди изследването (ако целта е да се диагностицират хронични, латентни инфекциозни заболявания) е необходимо да се спре приема на антибиотици и антивирусни лекарства. Условия за готовност на резултатите от ELISA Ако имате необходимите реагенти и добра организация на лабораторията, ще получите резултата от теста в рамките на 1-2 дни след вземане на кръв. В някои случаи, ако е необходима спешна реакция, този период може да бъде намален до 2-3 часа.

Резултатите от IFA са готови

Ако имате необходимите реагенти и добра организация на лабораторията, ще получите резултата от теста в рамките на 1-2 дни след вземане на кръв. В някои случаи, ако е необходима спешна реакция, този период може да бъде намален до 2-3 часа.

Декодиране на ензимен имуноанализ

Резултатът от висококачествен ELISA ще бъде недвусмислена присъда: желаното вещество се намира или не се намира в пробата. Ако говорим за количествен анализ, тогава концентрацията може да бъде изразена като числова стойност или определен брой знаци "+" (от един до няколко).

Анализирани показатели:

IgM - наличието на този клас имуноглобулини показва остър инфекциозен процес в организма. Липсата на IgM може да показва както липсата на специфичен патоген в тялото, така и прехода на инфекцията към хроничен стадий.
IgA с отрицателен IgM тест най-често показва хронична или латентна инфекция. IgM и IgA (съвместно присъствие) - два положителни резултата показват височината на острата фаза на заболяването.
IgG говори или за хроничността на заболяването, или за възстановяването и развитието на имунитет към инфекциозен агент.

Възможни резултати от ELISA

В зависимост от съдържанието на анализа, формулярът може да представя данни под формата на таблица, в която са изброени всички антитела или антигени с бележки за отрицателна или положителна реакция или ще бъде посочена количествената стойност на резултата (отрицателна, слабо положителна, положителна или рязко положителна). Последният вариант определя колко антитела се съдържат в анализираната проба. Друг количествен показател е индексът на повишеност на антителата, изразен като процент.

Указва колко време е минало от началото на инфекциозния процес (колкото по-висок е индексът, толкова повече).

Днес се произвеждат хиляди видове тестови системи ELISA, позволяващи откриването на специфични антитела и антигени при голямо разнообразие от патологии.

Следователно този анализ се използва в почти всички медицински отрасли. Диагнозата, поставена с помощта на ELISA, е гаранция за назначаването на адекватна терапия и ефективно лечение на заболяването.

накрая

Понякога, откривайки IgG антитела в резултатите от теста, например токсоплазмоза или херпес, пациентите изпадат в паника, като не виждат, че IgM антитела, които показват наличието на текуща инфекция, може да не присъстват изобщо. В този случай анализът говори за предишна инфекция, към която се е развил имунитетът.

Във всеки случай е по-добре да поверите интерпретацията на резултатите от анализа на лекаря и с него, ако е необходимо, определете тактиката на лечението.

Открийте повече: